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| 快速隔离使用噬菌体展示的单克隆抗体 | |||
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组单克隆抗体最初生产的隔离相关的遗传物质从一个杂种瘤细胞株,或通过放大通过聚合酶链反应(PCR)池获得它的细胞从免疫动物。 一旦基因物质被孤立,这是插入一个向量和表达 大肠杆菌 。 今天,重组单克隆抗体生产从高度复杂的库的抗体基因,特别是由 更始 合成结构多样性代表人类抗体曲目,都是优化了表达式 大肠杆菌 。
两个这样的库开发的MorphoSys AG(德国慕尼黑)生产治疗性抗体:HuCAL金,超过150亿HuCAL特异性,铂,超过450亿的特异性。 这些库构建了基于序列信息的获得的生物信息学分析人类免疫系统。 他们是由一个模块化系统的基因变异的代表42框架在免疫球蛋白重型和轻型链,结合六互补性决定区域(CDR)磁带,代表高变区域的抗体(参见图2)。 1
CDR磁带在图书馆被创建来模拟自然多样性的抗原结合位点使用一个优化的三核苷酸的策略,最大限度地提高潜在的多样性。 2 与向量转换包含库的数十亿特异性产生一个起始点隔离任何给定的特异性抗体。 对于这些库,这些抗体被创建在一个单价,因为Fc外事局格式区域没有必要为抗原绑定。 模块化结构的重组单克隆抗体片段意味着他们以后能很容易适应二价或全身的免疫球蛋白分子。
快速隔离使用噬菌体展示的单克隆抗体
所需的抗体与抗原结合特定标识等大型基因库选择而不是筛选。 所有选择的方法来绑定属性的物理链接日期的每个抗体在图书馆(表现型)与遗传信息编码给定的抗体(基因型)。 在众多选择技术,最常用的是噬菌体展示,核糖体展示和酵母显示。 噬菌体展示是最受欢迎和最有建树的选择方法。
噬菌体展示过程开始通过感染抗体基因包含 大肠杆菌 宿主细胞与修改噬菌体创建女儿噬菌体,每个都包含一个矢量编码的抗体库成员。 每个女儿噬菌体也会显示相应的抗体分子在其表面,这是通过基因融合抗体基因与蛋白质的一个噬菌体外套。 生物学的噬菌体抗体绑定属性链接到相应的遗传信息,稍后可以生成一个单克隆细胞株。 女儿噬菌体是从上层、沉淀、溶解在小卷,包含约10 13 噬菌体粒子每毫升,储存冷冻供以后使用。
然后选择所需的抗体通过噬菌体平移,这类似于固相免疫测定。 3 在这个过程中,抗原的兴趣是第一固定化,通常在微型板块井,磁珠,或一列(见图3),噬菌体然后孵育抗原允许捕获不多的噬菌体显示抗体亲和力与目标分子。
在这一步,其他物质如分子密切相关抗原可以被添加到解决方案能够有效地阻止不受欢迎的结合位点和耗尽图书馆的不必要的特异性。 绑定缓冲也可以操纵模拟更紧密的最后的试验条件,从而提高机会,候选人将工作在计划抗体免疫分析。 经过广泛洗涤除去所有不明确的材料,eluted绑定噬菌体是和放大复制在新的宿主细胞。
这个选择过程是反复几次,导致一个噬菌体人口高度浓缩与成员表达所需的抗体(即。 ,那些专门把抗原的兴趣)。 选择后,所需的抗体基因是孤立的作为一个基因库和插入一个抗体表达载体。 整个过程是在几天内完成,服从自动化。
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