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| 酶底物是由一个酶催化生成一个或更多的产品 | |||
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一般过程为横向流酶化验是描绘在图1该方法结合了酶反应与LFIA。 这个反应可能裂开一个化学键,形成一个新的债券,或导致构象异构化。 如果测试的目的是屏幕的酶的抑制剂,抑制剂也将出现在样品。 侧流试验片的后面可以使用酶反应完成后,或酶反应可以被集成到侧流试验片,这将需要一个特定的机制来控制反应时间和条件。 例如,一个侧流试验片可能会加上一个微流控装置来控制反应时间和条件。
从理论上讲,可以构造LFIA检测基质的消失,外观的产品,或两者同时,提供抗体是可用的。 然而,这些抗体可能不存在,尤其是对小分子底物如短肽。 在这些情况下,它是可取的标记底物与特定的绑定和/或探针。 根据底物和酶,不同分析格式可以构造。
描述了一个分析格式,使用磁粉,一个衬底,和一个特定的绑定我(B1)检测一种酶,包括债券解理发布一个产品。 一种酶底物是共价连接到一个磁性粒子和B1形成磁粒子基于衬底共轭。 当一个酶劈开了衬底共轭释放B1从磁粉,自由B1可以分开两个消化和完整的衬底轭合物通过磁场,检测到一个侧流试验片来证明这个原理,从SG metalloprotease被用作模型系统。 β-casein是个好衬底为metalloprotease。 生物素酪蛋白议员准备作为酶底物。
β-casein的酰胺债券上的生物素酪蛋白议员是由蛋白酶裂解释放一些或所有的生物素根从议员。 下院议员都被一个磁铁,和生物素分子在溶液可以发现I型横向流测试带。 侧流试验片的检测生物素可以普遍用于分析各种酶只要酶反应释放生物素从衬底共轭。
图3显示了结果metalloprotease在一系列的检测样品中掺入不同量的metalloprotease。 没有活跃的蛋白酶,所有生物素分子附在议员和被从解决方案通过一个磁铁,因此没有生物素仍然在解决方案。 当解决方案应用到类型我侧流试验片,所有的sa bp粒子释放被俘的共轭垫在捕获区我的固定化生物素bsa展示强大的蓝线(200?g停用)。 捕获区二显示几乎没有蓝色的信号。
在0.02 - -0.2?g的存在活跃的蛋白酶,一些生物素分子被释放从议员。 生物素分子发布的竞争,从而减少了sa bp股价bp能够被生物素bsa在捕获带我,导致一个较弱的信号。 sa bps饱和与释放生物素分子通过捕捉带我和绑定到多熔素在捕获区II产生一个强烈的信号。 带正电的多熔素在捕获区II可以捕获任何粒子与一个负电荷。 因此,颜色密度降低的捕获带我酶活性增加,而颜色密度区二增加捕获。 当数量的蛋白酶是一个或四?g,所有的生物素分子被释放从衬底配合到解决方案。 在这种情况下,捕获区我没有显示蓝色的线,而捕获区二世形成了强烈的蓝色线。
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