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| 磺酸基nhs lc生物素是生物技术获得的皮尔斯 | |||
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表面功能化粒子和磁性粒子,包括carboxylated和链霉亲和素改性蓝色粒子(sa bp,0.3?m),从实验室获得了刘海。 牛血清白蛋白(BSA),β-casein、链霉亲和素,抗生物素抗体,将链霉菌(SG)蛋白酶都买了从西格玛奥德里奇。 磷酸缓冲盐(PBS;50毫米磷酸钠,100毫米氯化钠、pH = 7.2),四硼酸钠,carbodimide,乙醇胺是购自Polysciences Inc。硝基膜,支持卡,纤维素样品,和毛细作用得到微孔公司垫。
制备酪蛋白mp。 25毫克的0.35?m磁性粒子(MP)与羧酸表面组与硼酸洗一次,一旦与PBS缓冲。 磁性颗粒的分离从上层清液是通过一个磁铁分离器。 洗过的粒子悬浮在1毫升PBS缓冲,和28.8毫克carbodimide在1毫升PBS缓冲是补充道。 这种混合物被轻轻地摇动15分钟。 洗四次的粒子与硼酸盐缓冲(pH = 8.5、0.1米)。
洗过的粒子悬浮在1毫升硼酸盐缓冲,和两个毫克β-casein在1毫升硼酸盐缓冲是补充道。 由此产生的混合物在室温下被轻轻地摇动隔夜。 粒子被洗了三次水,暂停一毫升乙醇胺溶液在水中50 mM。 这种混合物被动摇了30分钟。 粒子与水和洗五次悬浮在2毫升硼酸盐缓冲。 这些粒子将被称为酪蛋白议员为本文的剩余部分。
制备酪蛋白bp。 这个过程是一样的,β-casein共价附件的磁性粒子,除了carboxylated蓝色乳胶粒子(0.3?m)被用来取代carboxylated MP。 分离和洗涤被完成的离心分离。 这些粒子将被称为酪蛋白bp为本文的剩余部分。
制备生物素酪蛋白mp和生物素酪蛋白bp。 4毫克的酪蛋白议员,或者在300年?l酪蛋白bp,硼酸缓冲被添加到1毫克磺基nhs lc生物素在200?l硼酸盐缓冲(50毫米,pH = 8.4)。 这种混合物被轻轻地摇动四小时,洗五次使用三羟甲基氨基甲烷缓冲液(20毫米,pH = 7.2)。 粒子悬浮在1毫升三羟甲基氨基甲烷缓冲液进行存储并被指定为生物素酪蛋白议员或生物素酪蛋白bp。
制备生物素bsa。 500毫克BSA在9毫升硼酸盐缓冲被添加到300毫克磺基nhs lc生物素在1毫升硼酸盐缓冲(50毫米,pH = 8.4)。 这种混合物被允许的反应在室温下了三个小时。 这种混合物被dialyzed五次PBS缓冲。 生物素化的BSA的被指定为BSA生物素。
我带的制备型。 一嗨流120硝酸纤维膜在塑料支架卡是条纹与一行5毫克/毫升水中生物素bsa形式捕获区即类似的行多熔素溶液(50毫克/毫升)在水是打印到表格捕获区二世。 所有的分段进行了使用自动售货机的自动化。 印刷的卡片是在37°C干。
一种纤维素灯芯材料垫层压到年底,硝化纤维膜,接近捕获区二世,一个5毫米重叠。 一个共轭垫和一个示例应用程序是层压与侧板的硝酸纤维膜,接近捕获区即为共轭垫,一个10厘米长的条玻璃纤维垫材料装满了一个解决方案的?l 50的1%,200?l sa bp 20%蔗糖,100?l 2%,和250?l二层20 20毫米三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH = 7.2),其次是在37°C干燥四个小时。 信用卡被切成4毫米宽条。
II型带的制备。 一嗨流120硝酸纤维膜在塑料支架卡是条纹与一行2毫克/毫升抗生物素抗体在水中形成捕捉带我和一行多熔素溶液(50毫克/毫升)在水中形成捕获区二世。 膜是在37°c干一个纤维素灯芯材料垫层压到年底,硝化纤维膜,接近捕获区二世,一个5毫米重叠。 信用卡被切成4毫米宽条。
检测蛋白酶使用磁性基质配合。 每个样本包含80?g六的生物素酪蛋白mp在60?l 20毫米三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH = 7.2)是一个不同的掺入量metalloprotease,从0.02到4.0?g每样。 一个控制样本包含200的?g metalloprotease停用是包括。 样品在室温下孵化20分钟,磁性粒子都被一个磁铁分离器。 20?l产生的上层清液从每个样本应用于样品垫的每种类型我装置。 他们将开发30分钟(参见图3)。
使用非磁性检测Metalloprotease衬底配合。 5个样品,含有0.3?g的生物素酪蛋白bp在40?l 20毫米三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH = 7.2),1%二层20,服用metalloprotease的0至40摄食ng。 这些样品是孵化20分钟在室温下。 一个II型带是插入到每个样品开发。 漫画是发达30分钟(参见图5)。
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