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| 新兴的体外诊断技术荧光原位杂交 | |||
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荧光原位杂交（FISH）是一种新兴的体外诊断技术非常复杂的生物标本 - 如血液，羊水，和实体瘤 - 遗传异常的临床评价和表征。鱼类病理学家和遗传学家的特殊价值，促进广泛的分子遗传事件，如非整倍体，基因扩增，基因缺失，染色体易位，是很难检测，染色体核型分析，PCR或LCR的表征。鱼为主的体外诊断有可能显着提高癌症患者的生存可能早期发现恶性肿瘤和肿瘤手术后的更准确的预后评估。鱼体外诊断也可以适用于产前和产后的遗传分析。此外，该技术是特别有用的单个单元中的同时检测多个基因的异常，有可能节省分析时间，并限制试样的要求。
鱼用核酸探针 - 段标记的DNA绑定，或“杂交”的标本的DNA与目标 - 通常固定在玻片。与荧光分子标记的探针，通过使用荧光显微镜的探针 - 靶杂交未能识别。混合动力进一步分析与计算机成像设备。由于两个互补的DNA链之间发生杂交，标记的探针可用于检测遗传异常，产前紊乱，癌症和其他遗传疾病提供有价值的信息。与其他分子的DNA为基础的测试，这需要细胞裂解释放的核酸进行分析，FISH原位允许的DNA分析，也就是在其原生，细胞核内的染色体的形式。该属性允许单个细胞的染色体和基因的分析。
鱼的一个关键优势是它的能力为目标，只有那些感兴趣的基因序列。1986年，乔·格雷博士丹Pinkel，博士，同时在劳伦斯·利弗莫尔实验室，发现适当的封闭鱼使用克隆的人类基因或独特的DNA序列区域的DNA序列，列入抑制穿插重复DNA序列杂交（所以所谓的“垃圾DNA”）散落在整个基因组。这种抑制在很大程度上消除了非特异性信号。这一发现是由美国加州大学的专利独家许可Vysis公司（伊利诺斯Downers Grove）。
直接由共价结合的探针的荧光团标记的DNA探针的发展进一步简化的技术：旧的检测方法依赖于标记的探针-靶DNA杂间接结合的信号产生基团（如异硫氰酸荧光素FITC]抗生物素蛋白）无信号产生的DNA探针上的配位体（如生物素）（图1）。间接方法是更复杂的，需要额外的步骤，往往有更多的非特异性信号，由于异硫氰酸荧光素-亲和素复合物的固有粘性的。例如，在最近的研究中，测量HER-2/neu在乳腺癌标本的扩增，直接标记和间接标记的探针的比较发现了一个方法率99.3％的速度相比，与直接标记的探针只有79.7％的间接标记的探针。1因此，Pinkel和灰色发明的直接标记的探针的组合，有可能成为一种常规的技术，染色体异常的临床鉴定FISH。
词汇表α-卫星DNA：约171个碱基对的序列，发现在每个人染色体的着丝粒区域的不同副本的串联阵列。非整倍体：一个正常的染色体，较少量的（单体性）或更高（例如，三体综合征[3]）比正常的偏离。现场计数：计数的独特的荧光信号，或“斑点”，所产生的特定的染色体杂交时的α卫星地区的FISH探针。
程序;鱼，用直接标记的探针，是一个简单的程序，包括六个基本步骤（图2）。样品前处理，第一个步骤，它涉及到与靶DNA序列变性结束。接着，对探针施加到目标区域，目标DNA和探针杂交。目标杂交后，洗涤以除去非特异性结合的探针。最后，染液施加杂交的结果的可视化。
在这样一种方式，该探针具有与靶DNA样本的形态被保留时，必须将样品制备。组织类型，固定，样品嵌入过程影响变性前的预处理必要的类型。对于淋巴细胞，简单的变性条件下，如高温和低的盐或碱，是足够的。福尔马林固定的石蜡包埋组织，但需要更多的步骤，包括脱蜡和酶和/或化学处理，以使探针与靶DNA。杂交和洗参数是相当标准的，但在某些试验中，必须改变以适应某些探针的复杂性和特殊性。
使用五彩探头可同时检测多个基因鱼在一个单一的核事件。甲更大数量的荧光基团，可以在直接标记的探针一起使用，比在间接标记的探针。2 Multievent筛选能识别检体的克隆性质以及中期和间期细胞中的染色体重排。此外，允许列入探针杂交的控制位点（与测试位点），同时目标检测，可以提高检测的准确性。使用这些探针，它可以监视每个细胞核内杂交的成功或失败。
有几种方法，multievent在FISH检测。2一种方法是使用标记的探针杂交中检测到的每个目标用不同的光谱上不同的荧光基团。通过使用此方法至少有7个不同的染色体上已被同时检测到2的另一种方法，称为颜色编码，单独和组合使用不同的荧光团比用于标记探针的荧光团的数目，找出染色体目标3通过结合荧光团2 N 1的目标，可以检测到（N =荧光标签）。
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