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| 生物素化的碱性磷酸酶的大分子酶法测定 | |||
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可能的含量战略设计这种类型的固体支持物的结合容量测定的根本原因是为了简化后续的配体附着到微球体。我们的想法是要绑定的类似的尺寸和重量的配位体，将用于最终的应用程序的标记。使用这个号码作为指引的最终偶联反应消除后猜测合适的试剂的使用。试剂的使用效率有所提高这方面的能力是生物素 - 链霉抗生物素蛋白偶联的策略比传统的共价偶联的协议，在免疫分析和分子生物学应用正变得越来越流行的原因之一。
 表中。链霉亲和素包被的磁性微球的特性的不同的结合能力的测定格式。在制定相应的检测策略，适合不同大小的配体的检测和实用的手段应予以考虑。表II列出了四个广泛使用的检测方法，以及为每个共同标记。图1中所示的相应的反应方案。 
图1。基本的结合容量的测定策略：（一）使用生物素化的碱性磷酸酶的大分子酶法测定，其分子量（MW）约140,000;（二）小分子的荧光测定用生物素标记的荧光素异硫氰酸酯（分子量?633）;（三）小分子化学发光检测用生物素吖啶（MW?877）及（d）纯素放射性检测使用氚生物素（MW?247）。
四种常用的检测手段，在至少最敏感的顺序，是放射性的（RIA），酶联（EIA），荧光（FIA），化学发光免疫测定（CLIA）。1，虽然基于荧光免疫测定法是相当敏感，它们可以是有问题的。虽然我们最初的工作涉及这种类型的试验，我们不再使用它，因为必要的设备，以获得最佳的检测（荧光计）是不容易获得。此外，很难使用FITC-标记的一个共同的荧光标记，生物素，它限制了作为一个主要的结合容量的测定使用。这些困难包括一个事实，即，经FITC标记的生物素是不稳定的，而且，它很难溶解在水悬浮液中。由于这些原因，这种方法是从下面的分析描述省略。
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